日本奧林巴斯生物教學(xué)顯微鏡 BX53 的應(yīng)用技術(shù)如下：

奧林巴斯BX53明場觀察技術(shù)

樣品準(zhǔn)備：對于細胞樣品，可將細胞培養(yǎng)在載玻片上制成細胞爬片；對于組織樣品，通常切成薄片，厚度一般在 5-10 微米，然后進行常規(guī)的蘇木精 - 伊紅（HE）染色等，以便更好地觀察細胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

操作要點：選擇合適的物鏡，一般先從低倍物鏡如 4 倍或 10 倍開始，將樣品清晰對焦后，再根據(jù)需要切換到高倍物鏡。調(diào)節(jié)聚光器的高度和孔徑光闌的大小，以獲得最佳的光照強度和對比度，使圖像清晰、細節(jié)豐富。

奧林巴斯BX53暗場觀察技術(shù)

樣品要求：適用于觀察未染色且透明的微小物體，如細菌、細胞內(nèi)的顆粒等。

操作要點：需要更換為暗場聚光鏡，如 U-DCD 干式暗場聚光鏡或 U-DCW 油式聚光鏡。將聚光鏡的光闌調(diào)至合適大小，使光線以傾斜角度照射到樣品上，只有被樣品散射的光線才能進入物鏡，從而使樣品在黑暗的背景下呈現(xiàn)明亮的輪廓，可觀察到微小結(jié)構(gòu)和折射率的差異。

奧林巴斯BX53相差觀察技術(shù)

樣品特點：主要用于觀察未經(jīng)染色的活細胞或透明的生物標(biāo)本，如培養(yǎng)中的細胞、原生動物等。

操作要點：使用 uplfln - ph 或 pln - ph 系列相差物鏡以及 u - pcd2 相差 / 暗場聚光鏡。通過調(diào)節(jié)相差環(huán)的位置，使直射光和衍射光之間產(chǎn)生光程差，從而將樣品的密度和厚度差異轉(zhuǎn)化為可觀察的光強變化，增強圖像對比度，能清晰看到細胞內(nèi)部的細胞器、細胞核等結(jié)構(gòu)。

奧林巴斯BX53熒光觀察技術(shù)

樣品處理：對目標(biāo)生物分子或結(jié)構(gòu)進行熒光標(biāo)記，如用熒光染料標(biāo)記細胞中的特定蛋白質(zhì)、核酸等，或者利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)使細胞表達熒光蛋白。

操作要點：選擇合適的熒光激發(fā)塊，確保與所使用的熒光染料或熒光蛋白的激發(fā)和發(fā)射波長匹配。打開熒光照明光源，調(diào)節(jié)激發(fā)光的強度和曝光時間，以獲得清晰、明亮且無背景干擾的熒光圖像?？赏瑫r對多種染色的標(biāo)本進行成像，通過切換熒光濾色鏡組，觀察不同熒光標(biāo)記的結(jié)構(gòu)或分子。

奧林巴斯BX53微分干涉（DIC）觀察技術(shù)

樣品類型：廣泛應(yīng)用于觀察細胞、組織切片等具有三維結(jié)構(gòu)的生物樣品，特別是對于細胞內(nèi)的細胞器、細胞核等結(jié)構(gòu)的觀察效果較好。

操作要點：需要配備 DIC 光學(xué)組件，包括 DIC 棱鏡等。調(diào)節(jié) DIC 棱鏡的角度和位置，使兩束偏振光在樣品上產(chǎn)生干涉，從而產(chǎn)生具有立體感的圖像，可清晰地觀察到樣品的細微結(jié)構(gòu)和形態(tài)變化，呈現(xiàn)出類似浮雕的效果，能更好地了解樣品的三維結(jié)構(gòu)信息。

奧林巴斯BX53偏光觀察技術(shù)

樣品特性：適用于觀察具有雙折射特性的生物材料，如牙齒、骨骼、肌肉、神經(jīng)組織、肌動球蛋白纖維和有絲分裂的紡錘體等。

操作要點：安裝偏光附件，如偏光鏡、補償器等。將樣品放置在載物臺上，使光線通過起偏器變成偏振光，然后穿過樣品，再通過檢偏器進行觀察。通過旋轉(zhuǎn)載物臺和調(diào)節(jié)補償器，可以觀察到樣品在不同角度下的雙折射現(xiàn)象，分析樣品的晶體結(jié)構(gòu)和分子取向等信息。